Diabetologia：激活但功用受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次注意到口内自身抗锥体到注意到1标准型白血病外科副作用的重大突破赴援在老年人一时期就有极佳的阐述，多个口内自身抗锥体非典标准型的老年人之前有70%在血清转换后10年内患白血病，而随访15年的老年人这一%增高到84%。相较之下，占外科1标准型白血病一半以上的标准型1标准型白血病的发作组态还没有得到充分的科学研究。

越来越多的人开始用于分期该系统来定义1标准型白血病的重大突破：个锥体在注意到多种口内自身抗锥体时带入第1阶段性，注意到血糖异常时带入第2阶段性，注意到副作用时带入第3阶段性。一些多发口内自身抗锥体非典标准型的个锥体，在1期和2期，重大突破较更慢，并发展为发作的1标准型白血病。我们以后阐述了一组成员在首次探测到多种口内自身抗锥体结果显示后至寡10年无白血病的极更慢重大突破者，这组成员高血压人数寡，但外观上并不说明。随后，我们发现口内自身蛋白质特异性CD8+T细胞核底物在重大突破缓更慢的高血压之前基本不长期存在，但在近期发作和长期长期存在的白血病高血压之前很容易探测到。这可能表明，与重大突破高血压相较，这些高血压诱发底物的抑制增强。

早期科学研究表明，尽管抑制性T细胞核(Treg)存量也就是说，但白血病高血压长期存在一些组态缺陷，其之前仅限于对IL-2的底物操控能力减小。此外，白血病高血压之前的不稳定性CD4+T细胞核可能对抑制更具抵抗性，发挥为不稳定性T细胞核的抑止减弱，其本质造成的Treg和锥人体内造成的诱导Treg，以及蛋白质经历的CD4+T细胞核之前IL-2底物减弱。本科学研究的用以是阐述了CD4+抑制性T细胞核(Treg)在大群极缓更慢重大突破者之前的外观上，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法有：BOX科学研究是一项以人群为基础的纵向科学研究，在21岁以下肺炎的高血压血亲之前核对1标准型白血病的危险因素。我们以后阐述了长期缓更慢重大突破者的外观上，他们保持多重口内自身抗锥体非典标准型将近10年，但没有注意到白血病的外科副作用，更慢性或非同步癫痫诱发。随后，10名继续保持无白血病并主动提供大量血液结果显示的缓更慢重大突破者纳入T和B细胞核组态数据分析。在目前的科学研究之前，8名更慢重大突破者(SP组成员)，之前位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的口内自身抗锥体非典标准型。所有的参与者都所处1标准型白血病重大突破的1期，尽管一些人随后失去了口内自身抗锥体对某些蛋白质的非典标准型底物，然而，一名高血压已经所处2期至寡6年，但没有注意到外科副作用，一名高血压被病患为白血病，该受试者72岁，在采集科学实验结果显示时，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在数据数据分析之前对该供锥体同步进行了基本上数据分析报告。分离外周血单个核细胞核(PBMCs)，采用多参数流式细胞核奥义和T细胞核抑止试验数据分析报告供锥体之前Treg的频赴援、表标准型和组态。用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)同步进行无监督聚类数据分析，数据分析报告Treg表标准型。

结果：与心理健康供锥体相较，来自更慢重大突破锥体的心灵CD4+T细胞核的监督聚类推测，作用于的心灵CD4+ Treg频赴援增高，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)表达出来增高有关。一名HbA1c增大的高血压与重大突破缓更慢者和匹配的对照组成员相较，Treg谱有所不同。组态数据分析表明，与心理健康供锥体相较，来自缓更慢重大突破锥体的Treg介导的CD4+不稳定性T细胞核抑止明显受损。发挥为对不稳定性CD4+T细胞核CD25和CD134表达出来的抑止增高。

平面图1 险恶的表标准型数据分析推测，CD4+Treg亚标准型在更慢重大突破表头之前增高。由FlowSOM转化的Treg三楼，聚集在来自所有供锥体的活CD4+CD45RA -细胞核上。根据标上物表达出来鉴定出10个元簇:心灵T细胞核_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T细胞核;HLA-DR + GITR +心灵T细胞核;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)用于9个不同Treg标上转化的10个元簇的MST。每个端口都有一个战略性(100个战略性)，更大的元战略性(10个元战略性)在端口组成员四周上色。每个端口之前的饼平面图暗示单个标上的表达出来层级。(b)每个元聚类的热平面图，以推测整锥体标上表达出来。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)转化平面图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对于同位素为每个metacluster箱该线平面图(同位素> 0.05%)确定为HD和SP组成员:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T细胞核(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T细胞核(l)。橙色橘色都有人口为120人SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一组成员记号秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 用于CITRUS的预测模标准型证实，Treg频赴援的增高是重大突破缓更慢的标志。分级离次子通道(a - f)和柑橘数据分析(g-k)比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞核上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群锥体的都有性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表达出来同步进行分离，虚拟FlowSOM群锥体。(b) HD(黑点)和SP(白斑)组成员以及供锥体SP 606(橙色)之前CD25+ cd127的频赴援概要平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+离次子通道次子集的箱该线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来风速着色，箭头凸显的簇被识别为SP和HD表头之间的不同。(j)箱该线平面图推测了在SP(白斑)和HD(灰点)组成员之前，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的相对于同位素(%)。(k)直方平面图推测每个簇的表标准型(深蓝色)和Treg标上相对于表达出来与背景表达出来(橙色);上列，寄存器Treg_3;上头一行，寄存器Treg_4。背景与所有其他簇之前标上的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一组成员记号秩检验

平面图3 与心理健康献血者相较，重大突破缓更慢者心灵treg的GITR增高。每个心灵CD4+T细胞核元簇(心灵T细胞核_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T细胞核;HLA-DR + GITR +心灵T细胞核;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个表达出来标上的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)表头的表达出来热平面图(sp606不仅限于在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇之前所有HD(灰色)、所有SP(橙色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR表达出来串联，推测直方平面图(c)和概要平面图(d)。Wilcoxon一组成员记号秩和检验，p< 0.07(橙色)所有供锥体仅限于，p< 0.05(橙色)供锥体SP 606和匹配的HD不仅限于在测试之前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之前GITR表达出来，从分级离次子通道，从所有HD(灰色)、所有SP(橙色)和SP 606(橙色)串联，推测直方平面图(e)和概要平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon一组成员记号秩检验

平面图4 来自缓更慢重大突破的CD4+ treg细胞核操控不稳定性CD4+T细胞核的操控能力减小。SP组成员用橙色的该线和橘色暗示，HD组成员用灰色的该线和橘色暗示，橙色的该线/橘色暗示供锥体sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核同步进行分选。CD4+CD25−(；也者)被标上为CFSE, Treg按观察的%溶液。用抗CD3 /28微珠再生细胞核，养成3在此之后同步进行流式细胞核奥义探测。(a-d)与CD4+；也者相对于应该的treg养成(自锥体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者养成。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE抑止比例(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止比例。用于非典标准型对照(作用于的响应该细胞核含treg)算出抑止比例。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 不稳定性CD4+T细胞核对缓更慢重大突破的T细胞核再生的抑止更敏感。SP组成员用橙色的该线和橘色暗示，HD组成员用灰色的该线和橘色暗示，橙色的该线/橘色暗示供锥体sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核同步进行分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标上，treg按观察的%溶液。用抗CD3 /28微珠再生细胞核，养成3在此之后同步进行流式细胞核奥义(CD25反染)和细胞核因次子数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606；也者协同养成。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE抑止前年(b)。(c,d) CD25抑止前年(c)和CD134抑止前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成之前的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们算出出来的结论是，来自缓更慢重大突破次子的再生心灵CD4+Treg在GITR表达出来之前得到了扩展到和独特，凸显了进一步科学研究Treg在1标准型白血病风险个锥体之前的举例来说的必要性。

书名出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28